梅花鹿-牛异种体细胞核移植操作方法的研究

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.08.026

畜牧兽医学报 ›› 2014, Vol. 45 ›› Issue (8): 1381-1386.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.08.026

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梅花鹿-牛异种体细胞核移植操作方法的研究

王士勇^1，2，郑军军¹，杨月春³，刘宗岳¹，于淼¹，杨福合^1*

(1.中国农业科学院特产研究所，长春 130112； 2.延边大学农学院，延吉 133002；3.吉林农业科技学院动物科学学院，吉林 132101)

收稿日期:2014-01-21 出版日期:2014-08-23 发布日期:2014-08-23
通讯作者: 杨福合，研究员，博士生导师，E-mail：yangfh@126.com
作者简介:王士勇(1980-)，男，吉林永吉人，讲师，博士生，主要从事动物繁殖生物技术研究，E-mail：shywang@ybu.edu.cn
基金资助:
国家科技基础条件平台项目（2005DKA21102）；吉林省科技发展计划项目（20130101107JC）

Study on Manipulation of Sika Deer-Bovine Interspecies Somatic Cell Nuclear Transfer

WANG Shi-yong^1，2，ZHENG Jun-jun¹，YANG Yue-chun³，LIU Zong-yue¹，YU Miao¹，YANG Fu-he^1*

(1.Institute of Specail Animal and Plant Sciences，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Changchun 130112，China;2.Agricultural College of Yanbian University，Yanji 133002，China;3.College of Animal Science，Jilin Agricultural Science and Technology College，Jilin 132101，China)

Received:2014-01-21 Online:2014-08-23 Published:2014-08-23

摘要/Abstract

摘要：

本研究旨在对梅花鹿-牛异种体细胞核移植（Interspecies somatic cell nuclear transfer，ISCNT）的显微操作方法进行系统研究，从而优化其操作过程。以梅花鹿耳皮肤成纤维细胞为供核细胞，牛MⅡ期卵母细胞为受体，分别采用盲吸法、挤压法和脱羰秋水仙碱（Demecoline，DEME）化学辅助的方法去核，带下注射（Perivitelline microinjection，PM）、Pizeo破膜细胞胞质内注射（Break-membrane-cell intracytoplasmic microinjection，BMCIM）和全细胞胞质内注射（Whole-cell intracytoplasmic microinjection，WCIM）的方法注核，带下注核的卵母细胞电融合后化学激活，其余方法注核后直接化学激活，重组胚用CR1aa培养液体外培养。结果表明：（1）DEME辅助法去核率最高，挤压法最低，3种去核方法的去核率差异显著（P<0.05），去核时间差异不显著（P>0.05）；（2）PM组和WCIM组注核成功率分别为100.0%和94.8%，注核时间分别为31.0和35.1 s，显著低于BMCIM法（P<0.05），但是注核成功率显著高于BMCIM法（P<0.05），而且两者差异不显著（P>0.05）；（3）BMCIM组和WCIM组的激活率均显著高于PM组（P<0.05），其中一步法的BMCIM组最高，一步法和两步法在激活率、卵裂率和囊胚率方面均无显著差异（P>0.05）。结果提示：DEME辅助去核、Pizeo辅助破膜胞质内注射的一步法显微操作可有效用于梅花鹿-牛的异种体细胞核移植的研究。

Abstract:

The purpose of this study was to optimize the manipulation of interspecies somatic cell nuclear transfer (ISCNT) between Sika deer and bovine.It was used the Sika deer ear skin fibroblast as nuclear donor cell，and bovine MII oocyte as recipient.McGrath-Solter，extrusion and DEME chemically assisted methods were used in enucleation.perivitelline microinjection (PM)，break-membrane-cell intracytoplasmic microinjection (BMCIM) and whole-cell intracytoplasmic microinjection (WCIM) were used in nuclear injection.Oocytes were electrofusion after enucleation of PM before chemical activated and others were chemically activated without electrofusion.Reconstructed embryos were cultured in media of CR1aa.The results showed that：(1) The rate of enucleation with the DEME method was the highest，and the rate of extrusion method was the lowest.There was significantly difference (P<0.05) in the rate of enucleation among all the three enucleate methods，but not significantly difference (P>0.05) in duration of enucleation.(2) The rate of nuclear injection by PM and WCIM was 100.0% and 94.8% separately，and the duration of nuclear injection by PM and WCIM was 31.0 and 35.1 s separately.There was no difference between them (P>0.05)，their rate of nuclear injection were higher than which in BMCIM group (P<0.05)，but duration of nuclear injection was converse (P>0.05).(3) The rate of activation by BMCIM and WCIM group were higher than it in PM group (P<0.05)，and which in BMCIM group of one-step method was the highest.There was no difference among the rate of activation，cleavage and blastocyst between one-step and two-step method (P>0.05).The results suggested that one-step manipulative method of DEME assisted enucleation and pizeo assisted BMCIM was efficient in Sika deer-bovine ISCNT.

中图分类号:

S814.8

王士勇，郑军军，杨月春，刘宗岳，于淼，杨福合. 梅花鹿-牛异种体细胞核移植操作方法的研究[J]. 畜牧兽医学报, 2014, 45(8): 1381-1386.

WANG Shi-yong，ZHENG Jun-jun，YANG Yue-chun，LIU Zong-yue，YU Miao，YANG Fu-he. Study on Manipulation of Sika Deer-Bovine Interspecies Somatic Cell Nuclear Transfer[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2014, 45(8): 1381-1386.

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